Cynhyrchion

Mae ffosfforyleiddiad protein yn rheoleiddio swyddogaethau cellog amrywiol ac yn chwarae rhan allweddol yn natblygiad cynnar planhigion.I ategu ac ymhelaethu ar ymchwiliadau blaenorol i ffosfforyleiddiad protein mewn eginblanhigion Arabidopsis, gwnaethom ddefnyddio dull amgen sy'n cyfuno echdynnu protein o dan amodau annatureiddio â chromatograffeg affinedd metel-ion ansymudol (IMAC) cyfoethogi ffosffoproteinau cyfan mewn echdynion wedi'u disbyddu gan Rubisco, ac yna adnabod defnyddio electrofforesis gel dau-ddimensiwn (2-DE) a sbectrometreg màs cromatograffaeth hylif-tandem (LC-MS/MS).Nododd treuliad trypsin mewn-gel a dadansoddiad o smotiau gel dethol 144 o peptidau a gweddillion ffosfforyleiddiad, a dim ond 18 ffosffopeptid ac 8 ffosffosit a ddarganfuwyd yng nghronfeydd data safleoedd ffosfforyleiddiad PhosPhAt 4.0 a P3DB Arabidopsis thaliana.Roedd mwy na hanner yr 82 o ffosffoproteinau a nodwyd yn ymwneud â metaboledd carbohydradau, ffotosynthesis / resbiradaeth neu fecanwaith ymateb straen ocsideiddiol.Mae'n ymddangos bod cyfoethogi ffosffoproteinau cyfan cyn 2-DE ac LC-MS/MS yn gwella'r broses o ganfod gweddillion threonin a thyrosin ffosfforyleiddiad o'i gymharu â dulliau sy'n defnyddio cyfoethogi lefel peptid, sy'n awgrymu bod y ddau ddull ychydig yn ategu ei gilydd o ran cwmpas y safle ffosfforyleiddiad.Wrth gymharu canlyniadau eginblanhigion ifanc â'r rhai a gafwyd yn flaenorol ar gyfer dail Arabidopsis aeddfed, nodwyd pum protein sydd wedi'u ffosfforyleiddio'n wahanol yn y meinweoedd hyn, gan ddangos potensial y dechneg hon ar gyfer ymchwilio i ddeinameg ffosfforyleiddiad protein yn ystod datblygiad planhigion.