Cynhyrchion

Er mwyn mesur yn benodol nifer o fetabolion 5-fluorouracil (5-FU) a dau niwcleotidau monoffosffad mewndarddol, fe wnaethom ddatblygu dull gwreiddiol yn seiliedig ar sbectrometreg màs cromatograffaeth hylif - tandem (LC-MS/MS).Roedd y assay hwn yn caniatáu pennu: (i) cynhyrchiad mewngellol o 5-fflworo-2′-deoxyuridine-5′-monophosphate (5-FdUMP) o 5-FU neu 5-fluoro-2′-deoxyuridine (5-FdUrd) , (ii) effaith crynodiad 5-FdUMP ar y gymhareb mewngellol 2′-deoxyuridine-5′-monophosphate (dUMP)/thymidine-5′-monophosphate (TMP), a (iii) graddau secretiad 5-FdUMP a 5-FU o gelloedd diwylliedig dynol gan gludwyr ABC.O dan ein hamodau arbrofol, deorwyd celloedd â 5-FU neu 5-FUrd.Yna, roedd proteinau cellog yn cael eu gwaddodi gan fethanol.Darparodd y weithdrefn hon adferiad echdynnu uchel.Yn ogystal, i fesur secretiad 5-FU a 5-FdUMP o gelloedd, fe wnaethom fesur y moleciwlau hyn mewn cyfrwng diwylliant.Roedd cyfryngau naill ai'n cael eu chwistrellu'n uniongyrchol (5-FU) neu o dan echdyniad cyfnod solet gan ddefnyddio cetris echdynnu Cwyr Oasis (5-FdUMP).Perfformiwyd gwahaniad dadansoddol ar golofn dC18 Atlantis 3.5 μm, (100 mm × 2.1 mm id) gyda modd isocrataidd gan ddefnyddio byffer formate amoniwm / methanol / dŵr (5/5/90, v/v) fel cyfnod symudol.Nid oedd yr amser rhedeg yn fwy na 6.2 munud.Cafodd y analytes eu ïoneiddio mewn rhyngwyneb electrochwistrellu o dan fodd ïon negyddol.Fe wnaethom ddilysu'r dull dros ystod o 2.5-150 ng ml −1 yn ôl y cyfansoddion.Roedd amrywioldeb o fewn a rhwng profion yn is na 10% dros saith diwrnod.Roedd yr holl gyfansoddion yn sefydlog mewn celloedd neu mewn cyfrwng diwylliant pan gafodd samplau eu storio ar -20 ° C am o leiaf bythefnos, ac ar ôl tri chylch rhewi-dadmer.Ni welwyd unrhyw effaith matrics yn y ddau gyfrwng.