Cynhyrchion

Mae'r protein ORF45 o firws herpes sy'n gysylltiedig â sarcoma (KSHV) Kaposi yn brotein tegument cynnar-benodol gamaherpes-benodol.Mae ein hastudiaethau blaenorol wedi datgelu ei rolau hanfodol yng nghamau cynnar a hwyr yr haint KSHV.Yn yr astudiaeth hon, fe wnaethom arolygu rhyngweithiad ORF45 gan ddefnyddio panel o wrthgyrff monoclonaidd.Yn ogystal â'r proteinau kinase rheoledig allgellog (ERK) a p90 ribosomal S6 kinase (RSK) a nodwyd yn flaenorol, canfuom nifer o broteinau copredig eraill, gan gynnwys rhai amlwg o ∼38 kDa a ∼130 kDa.Datgelodd sbectrometreg màs fod y protein 38-kDa yn firaol ORF33 a'r protein 130-kDa yn USP7 cellog (proteas ubiquitin-benodol 7).Fe wnaethon ni fapio'r parth rhwymo ORF33 i'r 19 asid amino (aa) amino carboxyl-derfynol hynod warchodedig o ORF45 a'r parth sy'n rhwymo USP7 i'r motiff consensws a adroddwyd yn rhanbarth canolog ORF45.Gan ddefnyddio staenio imiwnfflworoleuedd, gwelsom gydleoli ORF45 gydag ORF33 neu USP7 o dan ïonau cyflwr wedi'u trawsosod ac mewn celloedd heintiedig KSHV.Ar ben hynny, rydym yn sylwi ar adleoli ORF45-ddibynnol o gyfran o ORF33/USP7 o'r cnewyllyn i'r cytoplasm.Canfuom fod ORF45 wedi achosi cynnydd mewn croniad protein ORF33 a ddiddymwyd pe bai naill ai'r parth rhwymo ORF33- neu USP7 yn ORF45 yn cael ei ddileu.At hynny, roedd dileu terfynfa carbocsyl gwarchodedig ORF45 yn y genom KSHV wedi lleihau'n sylweddol lefel y protein ORF33 mewn celloedd heintiedig KSHV a diddymwyd cynhyrchu virions epil.Gyda'i gilydd, mae ein canlyniadau nid yn unig yn datgelu cydrannau newydd o'r rhyngweithiad ORF45, ond hefyd yn dangos bod y rhyngweithiadau ymhlith y proteinau hyn yn hanfodol ar gyfer atgynhyrchu lytig KSHV.Mae KSHV ORF45 yn brotein amlswyddogaethol sydd ei angen ar gyfer atgynhyrchu lytig KSHV, ond mae'r union fecanweithiau y mae ORF45 yn cyflawni ei swyddogaethau hanfodol yn aneglur.Datgelodd ein hastudiaethau blaenorol fod yr holl bro otein ORF45 mewn celloedd yn bodoli mewn cyfadeiladau pwysau moleciwlaidd uchel.Felly ceisiasom nodweddu rhyngweithiad ORF45 i roi cipolwg ar ei rolau yn ystod atgynhyrchu telynegol.Gan ddefnyddio panel o wrthgyrff monoclonaidd, fe wnaethom arolygu'r rhyngweithiad ORF45 mewn celloedd heintiedig KSHV.Fe wnaethom nodi dau bartner rhwymol newydd o ORF45: y protein firaol ORF33 a phroteas cellog ubiquitin-benodol 7 (USP7).Rydym yn dangos ymhellach bod y rhyngweithio rhwng ORF45 ac ORF33 yn hanfodol ar gyfer cynhyrchu gronynnau firaol KSHV yn effeithlon, gan awgrymu y gallai'r ymyrraeth wedi'i thargedu â'r rhyngweithiad hwn gynrychioli strategaeth newydd i atal ailadrodd tlytig KSHV.