Cynhyrchion

Yn debyg i firysau RNA llinyn positif eraill, mae tombusviruses yn cael eu hailadrodd gan y cymhleth atgynhyrchu firaol â philen (VRC).Mae'r VRC yn cynnwys y RNA polymeras RNA-ddibynnol ar feirws p92 (RdRp), y hebryngwr RNA firaol p33, a nifer o broteinau gwesteiwr cyfetholedig.Er mwyn dod yn RdRp swyddogaethol ar ôl ei gyfieithu, dylai'r protein atgynhyrchu p92 gael ei ymgorffori yn y VRC, ac yna ei actifadu.Rydym wedi dangos o'r blaen mewn assay burum di-gell yn seiliedig ar echdyniad bod gweithrediad y firws styntiau trwchus Tomato (TBSV) RdRp angen ffactor(au) lletyol hydawdd.Yn yr erthygl hon, rydym yn nodi'r protein sioc gwres cellog 70 (Hsp70) fel y ffactor gwesteiwr cyfetholedig sy'n ofynnol ar gyfer actifadu TBSV RdRp ailgyfunol wedi'i gwtogi â N-derfynell.Yn ogystal, mae blocio bach-moleciwl yn seiliedig ar swyddogaeth Hsp70 yn atal synthesis RNA gan y tombusvirus RdRp in vitro.Ar ben hynny, rydym yn dangos bod ffosffolipidau niwtral, sef, phosphatidylethanolamine (PE) a phosphatidylcholine (PC ), yn gwella actifadu RdRp in vitro.Mewn cyferbyniad, mae phosphatidylglycerol (PG) yn dangos effaith ataliol gref a dominyddol ar actifadu RdRp in vitro.Rydym hefyd yn dangos bod AG a PC yn ysgogi rhyngweithio RNA [(+) RNA] llinyn plws-feirysol RdRp, tra bod PG yn atal rhwymo'r RNA firaol i'r RdRp.Yn seiliedig ar rolau ysgogol yn erbyn swyddogaethau ataliol amrywiol ffosffolipidau wrth actifadu RdRp tombusvirus, rydym yn cynnig y gallai tombusfeirysau ddefnyddio cyfansoddiad lipid pilenni isgellog wedi'u targedu i reoleiddio cynulliad VRC newydd yn ystod yr haint. (RdRp), sy'n gyfrifol am syntheseiddio'r epil RNA firaol mewn celloedd heintiedig o sawl firws RNA llinyn positif, yn anactif i ddechrau.Mae'r strategaeth hon yn debygol o osgoi synthesis RNA firaol yn y sytosol a fyddai'n arwain yn gyflym at sefydlu ymatebion gwrthfeirysol cellog wedi'u sbarduno gan RNA.Yn ystod cydosod y cymhleth atgynhyrchiad wedi'i rwymo â philen, mae'r RdRp firaol yn cael ei actifadu trwy broses nad yw'n cael ei deall yn llwyr sy'n gwneud yr RdRp yn gallu synthesis RNA.Trwy ddefnyddio TBSV RdRp, rydym yn dangos bod yr hebryngwr cellog Hsp70 cyfetholedig a ffosffolipidau niwtral yn hwyluso actifadu RdRp in vitro.Mewn cyferbyniad, mae ffosffatidylglycerol (PG) yn cael effaith ataliol ddominyddol ar actifadu RdRp in vitro a rhyngweithiad RNA RdRp-feirysol, sy'n awgrymu bod y microdomain bilen o amgylch yr RdRp yn effeithio'n fawr ar ei allu ar gyfer synthesis RNA.Felly, mae gweithrediad y RdRp firaol yn debygol o ddibynnu ar gydrannau gwesteiwr lluosog mewn celloedd heintiedig.