Cynhyrchion

Assay cromatograffaeth hylif perfformiad uchel newydd ar gyfer glycosyltransferases yn seiliedig ar ddeilliad ag asid anthranilig a chanfod fflworoleuedd.

Datblygwyd profion gan ddefnyddio cemeg labelu unigryw asid 2-aminobenzoic (2AA; asid anthranilig, AA) ar gyfer mesur gweithgareddau β1-4 galactosyltransferase (GalT-1) a α2-6 sialyltransferase (ST-6) gan hylif perfformiad uchel cromatograffaeth (HPLC) gyda chanfod fflworoleuedd (Anumula KR. 2006. Datblygiadau mewn dulliau deillio fflworoleuedd ar gyfer dadansoddiad cromatograffig hylif perfformiad uchel o garbohydradau glycoprotein. Biochem Rhefrol. 350:1-23).Defnyddiwyd N-Acetylglucosamine (GlcNAc) a N-acetyllactosamine fel derbynwyr a uridine diphosphate (UDP)-galactose a cytidine monophosphate (CMP) -N-acetylneuraminic acid (NANA) fel rhoddwyr ar gyfer GalT-1 a ST-6, yn y drefn honno.Cafodd cynhyrchion ensymatig eu labelu yn y fan a'r lle gydag AA ac fe'u gwahanwyd o'r swbstradau ar golofn TSKgel Amide 80 gan ddefnyddio amodau cyfnod arferol.Pennwyd unedau ensymau o'r ardaloedd brig o'u cymharu â'r safonau sy'n deillio o gydredol Gal-β1-4GlcNAc a NANA-α2-6 Gal-β1-4GlcNAc.Sefydlwyd llinoledd (amser a chrynodiad ensymau), manwl gywirdeb (mewn-a rhyng-brawf) ac atgynhyrchedd ar gyfer y profion.Canfuwyd bod y profion yn ddefnyddiol wrth fonitro gweithgareddau'r ensymau yn ystod ynysu a phuro.Roedd y profion yn sensitif iawn ac yn perfformio'n gyfartal neu'n well na'r mesuriadau traddodiadol seiliedig ar siwgr ymbelydrol.Gellir defnyddio'r fformat assay hefyd ar gyfer mesur gweithgaredd trosglwyddiadau eraill, ar yr amod bod y derbynyddion carbohydradau yn cynnwys pen lleihau ar gyfer labelu.Datblygwyd assay ar gyfer derbynyddion glycoprotein gan ddefnyddio IgG.Datblygwyd dull proffilio HPLC byr ar gyfer gwahanu glycanau IgG (deucanmlwyddiant G0, G1, G2, mono- a disialylated), a oedd yn hwyluso pennu gweithgareddau GalT-1 a ST-6 yn gyflym.At hynny, dylai'r dull proffilio hwn fod yn ddefnyddiol ar gyfer monitro'r newidiadau mewn glycanau IgG mewn lleoliadau clinigol.